1，新手 请问2×上样缓冲液，DTT怎么配制
（以下内容仅供参考）
2乘SDS-PAGE上样缓冲液（20ml体系）
1.0mol/L Tris-HCL (pH 6.8) 2ml
1.0mol/L DTT 4ml
SDS 0.8g
溴芬蓝 0.04g
甘油 4ml
dd水 定容至20ml
4℃冰箱保存，可以不分装，我们实验室一般用三个月以上
先配1.0mol/L的DTT,双蒸无菌水溶解4℃冰箱保存,配上样缓冲液的时候加入就可以了,都混匀保存也没问题的
2，请教上样缓冲液配方中DTT的用法
DTT是一种很强的还原剂，其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环（含二硫键）的构象稳定性。它的氧化还原电势在pH为7时为-0.33伏。
DTT的用途之一是作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。巯基化DNA末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体，特别是在存在氧气的情况下。这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验（如DNA在生物感应器中的固定）的效率；而在DNA溶液中加入DTT，反应一段时间后除去，就可以降低DNA的二聚化。
DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部（溶剂不可及）的二硫键，这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性（高温加热或加入变性剂，如6M盐酸胍、8M尿素或1%SDS）。反之，根据DTT存在情况下，二硫键还原速度的不同，可以判断其包埋程度的深浅。
3，DTT用来保护蛋白的终浓度是什么
因为有些蛋白有半胱氨酸的存在，所以会形成很多-SH键来维持蛋白质的高级结构又因为-SH键具有很强的还原性，为了避免-SH被氧化而造成蛋白失去活性，所以需要加入DTT来保护-SH键不被还原掉。但是DTT量太高的话又会破坏掉二硫键。也就是说DTT浓度太低起不到保护作用，浓度太高又会破坏结构。所以如果一些蛋白需要添加的话一般是建议在0.5mM~1.5mM之间。以摩尔数计算，5-10倍的量来保护-SH。如果蛋白报存buffer中含有15%左右的甘油，对蛋白具有很好的稳定作用。补充一点：如果dtt和蛋白摩尔比例比例增大到1：100，DTT就能破坏2硫键了，这时对应的浓度一般在10mM左右。
4，蛋白的氧化峰需要进行前处理才能出来吗
要回答这个问题，首先需要理解样品前处理需要达到的目的：减少人为降解和修饰，并且尽量多的释放肽段。
整个过程可以分为以下流程：先从组织、体液或细胞中提取蛋白质，拿到蛋白混合溶液（根据你的研究目的，可以对蛋白先做分离，或者不分离），接下来还原烷基化（还原的过程是将蛋白的二硫键打开，然后烷基化可以修饰巯基，防止游离的巯基再生成二硫键）处理，并酶解成肽段。
1，样品的收集与保存
组织样品
1) 对于人体切除的组织，有条件的话，最好用PBS（磷酸缓冲盐溶液，作为溶剂，起溶解保护试剂的作用）取完之后直接去血。如果没有去血，可以-80℃液氮保存，干冰运输。
2）对于小鼠、大鼠、兔子之类的组织样品，建议用灌流的方式来去血，尤其是像肝脏、胃、心脏这类大的组织，可以直接用灌流的方式去血，去得最干净。其次的方案是在后期剪碎的时候去血。
细胞样品
常规实验，建议收到5*1E6~1E7个细胞以上的样品量（有些实验需要的样品量会少一些，后面会详细讲）。细胞取好后，首先用PBS清洗一下细胞表面，因为大部分培养基里面都含有血清，这部分血清得洗干净了先~
如果是做分泌蛋白研究的话，首先用PBS清洗样品几次，再用条件培养基（不含有血清的培养基）进行培养，根据细胞情况，大概12个小时以后，离心，去掉细胞碎片，取上清，就能提取到分泌蛋白了。
血清样品
1）血浆样品：可以通过常用的EDTA抗凝管进行收集，收集到的血浆会呈悬浮状态，离心去掉血细胞。
2）血清样品：现在大部分研究都直接针对血清样品，它的成份更简单，没有凝集素，没有大量的血细胞，针对性会更强。收集血清样品时，直接把血清吸到管子里，室温静置让它凝结，上清黄色部分就是血清样品啦。
2，研磨或超声破碎样品，为了减少人为操作引入的修饰，通常会准备大量的冰，进行冰上的操作。同时还需要加入蛋白酶抑制剂，防止在操作过程中蛋白被样品中自带的蛋白酶降解掉。
3，充分熔接蛋白质，如果蛋白没有充分溶解，能提取到的蛋白就会很少，达不到研究目的。
4，充分解旋蛋白质，通常，蛋白质都是成球状的稳定状态，解旋蛋白质就是将球状蛋白中的二硫键打开，让它形成链状结构，以便进行下一步酶切。
5，酶解蛋白质，一般会用多种酶对蛋白质进行酶解。
6，去除杂质，我们要知道，质谱是一个非常灵敏的仪器，它检测的是多肽的质荷比。所有的盐类，以及所有会进行离子化的杂质，都会干扰到肽段的检测。所以我们会要求进入质谱之前的蛋白样品非常干净。在蛋白水平及肽段水平都会进行去除杂质的步骤。
更详细的，下次再聊~
5，蛋白双向电泳 平衡液配置好了可低温保存多久
IPG 胶条平衡两次，每次15 分钟。平衡缓冲液包括6 M 尿素和30% 甘油，会减少电内渗，有利于蛋白从第一向到第二向的转移。第一步平衡在平衡液中加入DTT，使变性的非烷基化的蛋白处于还原状态；第二步平衡步骤中加入碘乙酰胺，使蛋白质巯烷基化，防止它们在电泳过程中重新氧化，碘乙酰胺并且能使残留的DTT 烷基化(银染过程中，DTT 会导致点拖尾"point streaking") 。将IPG 胶条轻轻润洗，并去除多余的平衡缓冲液，然后放入第二向SDS 胶中。
6，NP40细胞裂解液怎么配制
组织裂解液配方：`
7M Urea(60. 06) 4.2042 g
2M thiourea(76.12) 1.5224 g
100mM DTT 0.1543 g
4% CHAPS 0.4 g
0.5mM EDTA 0.00146 g
40Mm Tris 0.0485 g
2%(v/v) NP-40 0.2 ml
1%(v/v) Triton X-100 0.1 ml
5mM PMSF用前加 0.00871 g
2%pharmalyte 0.2ml
共10ml分装成400µl/每管（可应用于30-80毫克组织裂解）
注：已配好分装成400µl/每管可供应用
不需另配！！！
细胞裂解液配方：
6M Urea(60. 06) 1.8018 g
2M thiourea(76.12) 0. 7613 g
65mM DTT 0.050 g
4% CHAPS 0.2 g
40Mm Trisbase 0.02425 g
共5ml分装成200µl/每管（可应用于50-100ml培养瓶内的细胞裂解）
细胞裂解液： 组织裂解液配方：
7 mol/L 尿素、 7M Urea(60. 06) 4.2042 g
2 mol/L硫脲、 2M thiourea(76.12) 1.5224 g
2% NP-40、 2%(v/v) NP-40 0.2 ml
1% Triton X-100、 1%(v/v) Triton X-100 0.1 ml
65 mmol/L DTT、 0.1003g 100mM DTT 0.1543 g
5 mmol/L PMSF、 5mM PMSF用前加 0.00871 g
4% CHAPS、 4% CHAPS 0.4 g
40 mmol/L Tris、 40Mm Tris 0.0485 g
2% pharmalyte（pH3-10）、2%pharmalyte 0.2ml
0.5mM EDTA 0.00146 g
25 mg/L DNase I、
7 mg/L RNase A、
20 mg/L aprotinin、
20 mg/L leupeptin、
2 mmol/L Na3VO4、
Phosphatase Inhibitor Cocktail 1
Phosphatase Inhibitor Cocktail 2
1ml水化液配方：
8M Urea(60.06) 0.48048 g
2% CHAPS 0.02 g
痕量溴酚兰 0.4 µl
1%的痕量溴酚兰（10mg+1000µl双蒸水）
450µl水化液 加DTT 0.00135mg
or 400µl水化液 加DTT 0.00126mg
7，请问各位：2-巯基乙醇的摩尔浓度是多少？谢谢！
主要用途： 用于合成树脂及用作杀霉菌剂、杀虫剂、增塑剂、水溶性还原剂等。
其它理化性质： 1.4996
健康危害： 吸入 、摄入或经皮肤吸收后会中毒。中毒表现有紫绀、呕吐、震颤、头痛、惊厥、昏迷，甚至死亡。对眼、皮肤有强烈刺激性。可引起角膜混浊。
环境危害： 对环境有危害，对水体可造成污染。
燃爆危险： 本品可燃，有毒。
危险特性： 遇高热、明火或与氧化剂接触, 有引起燃烧的危险。受高热分解放出有毒的气体。 加入保护剂 防止某些生物活性物质的活性基团及酶的活性中心受到破坏。如最常见的巯基，是许多活性物质和酶催化的活性基团，极易被氧化，故提取时常加入一些还原剂。一些易受重金属离子抑制生理活性的物质，加入某些金属螯合剂，把有害金属离子螯和掉，而保持被提取物的活性。 [螯合剂和巯基试剂] 巯基试剂在生化反应中有两个用途，一是防止蛋白质或酶等分子中的SH-基氧化成S-S，二是某些酶反应中维持体系的还原环境。经常应用的巯基试剂有二硫丁醇类化合物（如二硫苏糖醇DTT、二硫赤酰糖醇DTE）和2-巯基乙醇，谷胱甘肽也经常应用。一般来说二硫丁醇类是常选用的巯基试剂，不仅是因为挥发性低，难闻的气味较少，而且氧化电位低，比2-巯基乙醇浓度低很多的情况下，可以使其他二硫化合物完全还原。螯合剂用于控制反应中金属离子浓度或去除金属离子，常用的螯合剂有EDTA（乙二胺四乙酸）、EGTA、1,10-二氮杂菲、柠檬酸和磷酸等。
抗氧化。用PBS配成100X的浓度，4度避光保存，用2周。
瓶子上没有特殊标注，应该就是纯的吧？
精华总结
雨露，是万物生长的灵丹妙药，它能让万物欣欣向荣，给人带来希望和欢乐。起名，是给孩子取名最重要的一步，因为名字，在某种程度上就是一种文化。一个好的名字，可以让孩子从小拥有一个好的起点。那么，旸字取名呢，有着什么样的寓意及含义？
1、旸是五行金之字，五行属水，寓意孩子聪明机智，有大智慧，富有爱心。
根据五行属性来取名，金能克水，就像是金被水淹没了，所以会出现水变少，阳气不充足的情况。而旸字五行属水，表示有希望的样子，寓意孩子聪明机智，有大智慧，富有爱心，有爱心之义，对人非常友好，人缘非常好。由于在起名时需要注意五行八字，所以名字要避开太多不利因素。例如孩子取名为旸这个名字时，可选择五行属金且与水相冲或水火相济或金水相济等字面寓意相搭。
2、旸字是木之金之字，五行属木，为金之态，寓意孩子金木水火土五行协调，和谐发展。
雨露的滋润，日出而作，日落而息，都让人感到无比满足。旸，字音shèng,寓意着孩子有一颗包容和感恩之心。这与“日出而作、日落而息”有异曲同工之妙……旸给人带来欢乐、吉祥的同时，也寓意着孩子金木水火土协调发展……
3、旸是一种很有灵性的字，可形容孩子生机勃勃，乐观向上。
【旸】有光明、温暖、明朗的意思，可用作名字。【阳凯是太阳之意。【阳阳阳】阳代表明亮，阳代表光明及温暖。用阳代表光明的事物，表示孩子生机勃勃，乐观向上。【阳欣可表示欣欣向荣之意。【阳和】可表示温暖的意思。
4、旸字取名，寓意孩子乐观向上，对生活充满希望。
旸字寓意孩子乐观向上，对生活充满希望，乐观积极的生活态度，有助于提高孩子的自信心。另外旸字取名还有着积极向上、乐观开朗、吉祥幸福、生活美满、幸福美满等美好祝愿，其寓意吉祥。而且旸在中国汉字里是非常多见的一个字，我们可以将这个字用在名字中来表达。旸字取名代表着孩子未来很美好而充满希望。如果将其用于起名中，则代表着孩子未来会有很多希望。同时也象征着孩子将来会有所成就。
5、旸作为名字有吉祥富贵之意。
旸这个名字，在很早的时候就被赋予了吉祥富贵的寓意，因为它在名字中的意思很多。所以有很高的吉祥富贵之意。这个名字将孩子命名为【旸】具有美好的寓意。
