家庭怎样做植物组织培养？
家庭组织培养
植物的组织培养没有最基本的条件和物品是搞不成的，当时合理的利用一些最简单的用具也并非无法办到。
一、最必需的物品
1、.家用高压锅 1个最好大一点的，装的东西多一点。用于培养基、无菌水等的消毒
2、接种箱 （无菌箱）1个 ，需要自己自制，用一些木板和一块玻璃和二尺布料。用于接种和转移。
3、药用天平1架 最好是500g称量的，小一点也可以，主要用来称琼脂、糖等物品。
4、不锈钢锅或铝锅（煮汤、面条的那种）买。用于煮制培养基用的。
5、搅拌和分装培养基用的调羹一个，用于煮制和分装培养基。
6、培养用的瓶子若干，
7、制棉塞用的棉花、纱布和线若干，用于做瓶口的塞子，要注意的是，棉花要使用普通做棉衣的棉花，不要用医院用的脱脂棉，这样容易穿塞污染。
8、牛皮纸、橡皮圈若干，用于包瓶头和扎包头纸用。
9、酒精灯1盏、解剖刀1把，刀片若干、镊子2把、10ml、100ml量筒各一个，2ml移液管1只、药棉若干。
二、怎样解决蒸馏水和基本药品
培养基的用水在一般人的心目总是觉的十分重要的，其实是多余的担心。冷开水、清洁的河水都是给以用的，并不影响培养的效果。市场上出售的纯净水更是一般培养基理想的用水。最常用、最必要、用量最大的只需购买以下几种就行了。
1、MS培养基的大量元素（家庭或所谓袖珍组培室的培养一般采用MS基就可以了。）共5种。也可以买市售的MS培养基
（1）、硝酸铵
（2）、硝酸钾
（3）、 氯化钙
（4）、硝酸镁
（5）、磷酸二氢钾
2、酒精
3、精密试纸（PH 5.4－7.0）
4、漂白粉或漂白精
5、琼脂
6、白糖
7、福尔马林
8、高锰酸钾（可以到医院或药材商店去买）
9、微量元素、铁盐、维生素类以及激素类药品应用量极少。比如一些激素、维生素类的药品及有针剂也有片剂，他们都有比较准确的含量，你可以去按你的需要去配制比例。
爱好者在家庭环境下进行组织培养的探讨与建议植物组织培养技术，尤其是快速繁殖，并非只有专业人员和专业实验室才能够完成的。作为对多肉植物和组织培养有着浓厚兴趣的爱好者，在充分利用家庭条件的基础上，同样可以制备出自己的试管苗来的。在我们进行多肉植物的栽培中认识到，一些比较名贵的园艺品种，比如：万象、玉扇、寿、高纹鹰爪等十二卷属品种，还是缤纷橄榄、何鲁牵牛等块茎类植物，甚至于星球属、岩牡丹属等等，这些植物的常规繁殖系数很低，他们都可以采用组织培养来解决其繁殖问题，并且可以得到相当数量的幼苗。对于奇想天外等种子萌发困难的植物，同样可以借助组织培养来进行无菌播种。在进行组织培养过程中，不但可以对培养的植物有更深一层的认识，对常规的栽培有着相当大的意义。许多搞组织培养的专家，最初都不是专业学组培的，就是凭着兴趣和探索精神取得辉煌成绩的。关键是，爱好者有着浓厚的兴趣，非凡的观察力和细致入微的操作，这些都可以弥补非专业的缺陷，并且可以充分利用日常生活中的各种可利用资源，这些就足以让爱好者在家庭环境下完成组织培养了。同时这也不仅仅满足了自己的兴趣，还可以有一定的经济收益，甚至可以有所创新和发明。
一、如何解决场地和基本设备：
进行组织培养，没有一定的设备是无法开展的。正规实验室的组织培养设备是昂贵的，不适合家庭消费，但如果能有途径买到廉价的实验室设备，那就在好不过了。如果没有办法搞到实验室设备，就不妨动手自己制作一些简单的设备。
1.无菌操作的主要设备——接种箱和压力锅：
接种箱：植物组织培养的主题操作需要在一个相对密闭的无菌环境中进行。那么说我们首先要创造一个密闭的环境，可以利用一些木料、塑料板、有机玻璃、铝合金骨架等等廉价的材料，动手粘合一个小巧的接种箱。具体的参数可以找一本“食用菌栽培”的书籍，模仿种蘑菇的接种箱做一个即可。需要注意的是，组织培养的接种箱的密闭性要求比较高，尽量避免腐朽的木材和易生锈的材料，箱子的顶端按放两盏灯：20w的紫外线灯和20w的日光灯。箱体的周边尽量采用玻璃材料，因为这样便于观察，有时候接种箱还可以借用为培养箱，周边采用玻璃材料更方便于观察和培养。
高压锅：主要用来对培养基和其他材料的灭菌。在实验室通常使用医用高压灭菌器，然而在家庭要充分利用厨房使用的高压锅，高压锅的压力要低于灭菌器，但是适当延长灭菌时间，还是可以取得较好的效果的。比如：对培养基灭菌40分钟就基本上可以达到灭菌效果（灭菌器是20分钟）；无菌水采用间歇灭菌法，先用高压锅压40分钟，放置24小时，再压20分钟即可达到效果。
2.场地：
这个就因人而易了，总体的要求就是进行组织培养操作的地方要尽量无尘，减少空气流动，最好有一定的阳光。比如书房、写字间都可以用来进行无菌操作。
进行培养基的配制可以借用一下厨房，但所使用的器具必须和厨具分开。一般说，组织培养中的几乎全部化学物质对人体是无害的，除了少数激素类物质和灭菌剂。对于有毒害的物质，需要认真保管，以免发生危险。
3.辅助设备：
主要指冰箱，它是用来储存化学物质和培养基的。天平，可以采用感量在100克的托盘天平，甚至用中药的药衡都可以代替。培养架，这个就更简单了，采用铝合金-玻璃的培养箱既可以满足要求，如果日光不足，可配合日光灯补光等。
4.化学试剂：
化学试剂是不可缺少的，因为组织培养的核心就是培养基的成分，而并不是简单的无菌操作。一些用量较大的化学物质是有必要买的，比如大量元素（硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙等）、高锰酸钾、甲醛、酒精、白砂糖、琼脂等等。微量元素和有机复合物不需要购买，因为它们的用量很小，我们可以用蔬菜浸汁或者马铃薯浸汁来代替。激素是必不可少的，他们的称量需要借助分析天平，但这是家庭条件所不允许的，如果有条件可以借助关系单位代替配成母液，每次取一些使用即可。最好的办法是到农资商店（卖农药化肥的地方），它们一般出售农业用的激素，有的是用安瓿装的，按照一定的比例加入到培养基当中即可。近几年来，有些化学品公司开始生产植物组织培养基原粉，只需要称取一定量加水即可，很方便。比如泛生化学品公司生产的ms原粉，只需要称量40克，加1升水，用微波炉加热5分钟即可分装，相当简便。
消毒剂通常采用氯化汞（剧毒），如果不容易搞到，可以用漂白粉代替。
调节酸碱度时，可以采用家庭常用的纯碱和白醋。
5.培养容器和玻璃仪器：
组织培养的容器要求并不高，只要玻璃颜色为透明色即可（钠玻璃不可以）。
我们可以到垃圾站去看看，捡回一些废旧的果酱瓶就可以了。比较好用的是阿香婆辣酱瓶，我们实验室也是采用的这种瓶子。瓶子的封口膜采用聚丙烯塑料即可，如果不好找到，可以采用微波炉专用的锡箔纸甚至方便面的袋子，折叠成双层，用橡皮圈固定即可。
其它玻璃仪器，比如烧杯、玻璃棒都可以用家庭的杯子和筷子代替；一些度量仪器，如量筒和移液管最好到玻璃仪器商店购买，恐怕花不了20元钱就可以配置一套相当棒的组培玻璃仪器。
6.其它：
还有一些用品是必需的。比如精密ph试纸（5.4~7.0），需要买一本，大约花1.5元即可搞定；酒精灯也不需要买，用墨水瓶配上一个玻璃环，再加上一个棉花芯，最后用农夫山泉矿泉水的瓶盖做灯冒，这样的酒精灯很小巧，适合接种箱使用。刀子剪子镊子是必需的，到花市的工具摊位上，花10元钱全部搞定，注意选比较小巧的工具。
关于用水，按理说应该使用蒸馏水，但是我们家庭饮用的纯净水比蒸馏水还要纯，那么说借用一些饮用水就可以了。我们曾经采用康师傅纯净水进行动物细胞的培养，效果都是很不错的，更何况于植物细胞培养了。
以上是组织培养的基本设备和试剂，主要突出了他们相关的替代品，因为作为组织培养中的快速繁殖，它的要求是相当低的。我们的家庭培养和工厂化是不同的，工厂化生产组培苗要追求高增殖率，所以它的要求就比较精细和标准。我们的家庭培养则不需要那么准确，只要达到培养成功的目的即可。当然，如果想提高增殖倍率和试管苗的品质，必须尽量贴近实验室的用具和器材，代用品总是有一定的缺陷的。
（一）必须的设施物品及代用品
1、代用品
家庭用的电冰箱，可用于贮存培养基母液（4℃）及需低温贮存的药品（如生物调节剂）。
高压锅：它可用于培养基、无菌水、玻璃器皿及其他组培用具的消毒灭菌。如所用水硬度大可用凉白开水，进行消毒灭菌。避免被消毒灭菌物品表面结垢。
不锈钢锅或铝锅：它可用于培养基、溶化琼脂（起水浴锅作用）及组培用具消毒灭菌。
刷净的废弃食油桶：它可以用来贮存蒸馏水。
小白瓷碟：可以用于接种及盛放消毒液（若放消毒液，就不要再食用，以免中毒）。
日光灯：它可用于组培过程中光源补充。
洗净废弃的罐头瓶：它可以用于组培培养之用，代替锥形瓶、试管。
组培场地可在自己的房间内进行。在配制培养基和接种时，不要赶在家庭成员较多时进行，如室内已安装了空调，那么在初代培养和继代培养、乃至小苗过渡时均有好处。
2、自制用具
（1）接种箱的制作：组培过程中的超净工作台是很贵重的设备。如果我们用自制的接种箱来代替，就可以大大节省开支，有利于普及。
自制的接种箱的用料，可以是胶合板、纤维板、玻璃（3毫米厚）、木条（装修房屋用的龙骨），甚至可以用使纸板的包装箱（包装箱的质量要稍好一些的，如电视机的包装箱），也可以用有机玻璃。
其接种箱的大小，可以根据各自的家庭条件制作。制作太小不便于操作，但相对来说消毒容易，且占地较少；制作较大的便于操作，但消毒工作显得不易，且占地面积较多。一般来说作成70厘米长、45厘米宽。50厘米高较为合适。
（2）培养箱的制作：培养箱可代替培养室，也可以用于过渡苗使用。它可以用玻璃制作，或利用长方形鱼缸。因此，可用玻璃粘结制作。其大小可按自己家庭居室面积和组培的量来决定。
3、需购置用具
普通天平（500克）：用于称量配制培养基药品，或用称量金银、中药的戥子称，用于称量配制培养基药品、微量元素及生物调节剂；或购买微量元素及生物调节剂时，买已分装的。酒精灯1盏：用于接种时，灼烧消毒灭菌。漏斗（亦可用购买桶装食用油，所配给的漏斗）：用于分装培养基用。长镊子2把：用于接种。解剖刀2把、刀片若干：用于接种。10、50、100毫升量筒各1个：用于配制培养基用。长把牛角勺2把：用于配制培养基取药品。1、2、5毫升移液管各1个：用于配制培养基用。
耐高温塑料膜或牛皮纸：用于包扎培养瓶口及表糊自制接种箱内部棱角处。橡胶圈：用于绑扎培养瓶口。脱脂棉：用于操作人员及组培用具酒精棉球消毒。pH(5～7）试纸1本：用时可剪成小条检测培养基pH值。酒精1瓶：用于酒精灯及消毒。漂白粉1瓶：用于消毒。福尔马林1瓶：用于接种箱消毒（在每次操作前2～10小时，将10～20毫升福尔马林倒入小白瓷碟内，在操作前取出）。MS培养基所需药品；用于配制培养基。盐酸及氢氧化钠：用于调pH值。如若购置1盏紫外灯，进行室内及接种箱消毒更为理想。
（二）操作时注意事项
家庭操作与单位不同，因而要注意以下事项：要注意安全，妥善保管药品。特别对老人和小孩；操作时要消毒仔细严格，接种时操作人员戴好口罩、工作帽，避开电风扇及大风沙天气，家庭成员多时避免操作；消毒前后避免家庭所养宠物进人工作间；药品称量要准确无误；如果家庭不具备温度调控（如调温空调），应避免在盛夏、寒冬进行；红掌组培要一步步来作，可先作容易组培的花卉，待取得经验后再做难作的花卉。
1.培养容器和玻璃仪器的准备：
进行培养基的配制首先要准备好培养瓶和配制使用的玻璃仪器。培养瓶一般使用各种果酱瓶，要先用洗洁精浸泡瓶子4~8小时，再用流水冲洗数次。其他的玻璃仪器同样需要这样清洁，直到玻璃壁上不挂水珠而是成为水膜为止。清洗完毕的玻璃容器要倒扣，空去瓶内的水。
清洗干净的容器要注意防尘，尽量放置在玻璃柜中。更简单的是用干净的毛巾将容器盖住。
移液管要用吸球来清洗，反复用蒸馏水吹吸直到洁净为止，将移液管放置在一个长筒中，便于使用。一般移液管只能使用一次，即要清洗，所以有多必要准备几只移液管，建议：10ml/2支，5ml/2支，1ml/5支。
2.培养基的配制：
经典的组织培养用培养基是ms配方，其基本上划分为：大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、植物激素、糖和支持物。这些成分的用量都在毫克级，用普通天平是难以称量的，为了解决这个问题，我们可以按比例放大各成分的用量配制成母液，使用的时候按一定比例加入即可。
下面将一种ms培养基的母液配制方案公布如下：
大量元素：硝酸铵66.0克；
硝酸钾76.0克；
无水氯化钙13.3克；
七水硫酸镁14.8克；
磷酸二氢钾6.8克。
以上分别溶解后合并定容到1升，每配制1升标准ms培养基取25毫升。
铁盐：七水硫酸亚铁5.56克；
乙二胺四乙酸二钠（edtana）7.46克。
以上两种分别加热溶解，混合，定容到1升，调整ph到5.5以下，每配制一升ms取5毫升。
微量元素和有机复合物的用量过于微小，为了简便我们可以用蔬菜提取液或者马铃薯提取液代替。通常我们习惯用100克菠菜加100ml的水煮沸10分钟，过滤留滤液，每配制1升ms培养基加入20~50毫升提取液。同样也可以使用带皮马铃薯100克加200毫升水煮沸15分钟，过滤留滤液，每升ms加入50~100毫升即可。
加入上述各组分后，每升ms培养基还需要加入白砂糖30克，琼脂7克。
这里要说明的是，糖和琼脂都是可变的量，要根据需要调整。另外制作果冻用的卡拉胶也可以代替琼脂，透明度更好。
上述各成分加入后，定容到800毫升左右，用微波炉加热，直到琼脂全部溶解为止。此时加入所需的植物激素（通常配制成0.1%溶液，这样每取1毫升，换算到培养基中就是1ppm）。然后加水定容到1100毫升（1.1升），之所以多出0.1升是为了抵消分装和消毒中的损耗。最后用酸碱调整ph到5.8~6.0。
3.使用ms原粉配制培养基：
目前国内的一些化学品公司开发了简便的ms培养基原粉，大大简便了培养基的配制，根据不同公司的说明选择培养基的种类。下面就以ms原粉为例： ms培养基原粉，包括了大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、糖和琼脂，一般按使用方法称量，微波炉加热溶解，加入激素，定容到1100毫升（1.1升），调整ph值到5.8~6.0。
4.分装：
将配制好的培养基分装在培养容器中，注意要趁热分装，因为琼脂在40度以下就会凝固。每个培养瓶装培养基大约是瓶容积的1/6~1/5，注意不要将培养基挂在瓶的外壁，这样容易造成污染。分装后用聚丙烯薄膜或着方便面的袋子封口，用胶圈固定（胶圈尽量选择自行车的内胎，这种胶圈比较耐热）。
5. 灭菌：
采用家庭压力锅消毒，建议到医疗器械用品商店买一些“灭菌效果试纸”，它们可以指示灭菌效果，当灭菌达到效果时会变色。把试纸和培养基同时放入锅内，加热到有大量蒸汽冒出，再加上压力伐，维持小火30~40分钟。
灭菌完毕后自然冷却，将培养基取出，放在阴凉无尘处备用。
6. 接种箱的准备：
新制作的接种箱必须要清洁干净，尽量做到无死角。每次使用前2小时，将操作所需要的全部物品放入接种箱，再用一个小烧杯加入3~5克高锰酸钾放入接种箱内，在箱内向烧杯中倒入2~3毫升的甲醛溶液，大约几秒钟后会看到甲醛蒸汽出现，这样可以对接种箱内的所有物品进行初次消毒；同时打开紫外线灯照射。紫外线灯是高电压穿激汞蒸汽产生的，紫外线进行第二道灭菌，在紫外线照射大约15分钟后，会激发氧气形成臭氧，臭氧作为第三道灭菌防线，这样经过三次灭菌，接种箱基本上可以达到无菌标准。
在操作前15分钟内，向刚才蒸发甲醛用的烧杯中倒入5毫升浓氨水，因为甲醛对人体有毒害作用，氨水可以和甲醛形成一种叫做“六亚甲基四胺”的固体物质，从而中和了甲醛的刺激性蒸汽。这个时候紫外灯不要关掉，要继续照射，直到操作前5分钟关闭，维持黑暗5分钟，然后再打开日光灯进行操作。维持5分钟黑暗的原因是，紫外光对微生物的杀灭是作用于dna的胸腺嘧啶，形成四聚体，但是微生物具有一种光复活蛋白，可以在有可见光的环境下还原胸腺四聚体，而使微生物复活，这个作用叫做“光复活作用”，所以在关掉紫外灯后必须维持黑暗几分钟，避免光复活作用的出现。
怎样在家庭开展组培工作
制备
家庭组培因受到条件的限制，不可能配置大量的配养基，，一般每次配置1升为宜。煮制后用PH试纸测定后，分装成35－40瓶，塞好棉塞，包好包头纸。（棉塞一定要用作棉衣的棉花卷制，不能使用脱脂棉，然后用纱布包紧，用棉线扎好。棉塞的松紧以手提棉塞瓶子不滑落为宜。）然后放入高压锅里高压灭菌，待高压锅喷嘴喷出蒸汽时，扣上压力阀，从压力阀喷气时起计时，连续维持15－20分钟后关火，压力消失后，打开锅盖，取出配养基，放入接种箱内待用。初次实验时，灭菌后的培养基应放置三五天后，观察无霉菌生长时才能使用。如有霉菌长出，这说明灭菌时间不够，，需要适当增加灭菌时间。
接种
将灭菌后的配养基、无菌水、消毒药水及使用的器材放入接种箱内，因接种箱内的体积相对较小，所以所用的一切物品都要有序地摆放在相应的位置上，不能随意摆放，箱内湿度较大，点酒精灯一定要是用打火机，不要使用火柴。要特别注意准备好装污水、污物的容器，尽可能地大一些，因为操作时是不容许开箱取物的。把所有的物品放置好以后，将一装有10－20ml福尔马林的磁杯放入箱内（最好不要使用玻璃杯，因反应时温度较高，容易炸裂。），倒入2－5g高锰酸钾（PP粉），使其蒸气充满箱内，达到灭菌的效果。这时要将接种箱的通气孔和操作孔封闭好，避免甲醛蒸气很快散尽。待箱内蒸气散尽后，才能开始接种工作，这段时间大约需要5－10个小时。
接种时，揭去密封在接种箱通气孔和操作孔上的密封物，取出熏蒸用的磁杯，将接种用的材料送入接种箱内，开启紫外线灯，十五分钟后关闭紫外线灯，开启照明灯，即可开始工作。操作时一定要树立无菌观念，要把一切物品都看成是带菌的，要时时都注意防范。工作是由于箱内温度较高，湿度较大，手容易出汗，所以每接种一瓶后都要用酒精擦拭手指，也可以戴指套。另外，操作时要注意防火，由于空间较小，一不小心就容易烧伤手指或引起酒精起火。打开瓶塞时，要将瓶口置于酒精灯上方，用右手的无名指和小指夹住棉塞尾，轻轻将棉塞拔出，棉塞不能置于箱内物品上，应用手指夹住，接种后，将瓶口在酒精灯上烧灼一下，棉塞也烧灼一下，，然后在酒精灯火焰上方轻轻塞好，扎好包头纸，用铅笔标明品种、接种日期、编号等，然后重复下一瓶。
其实，用接种箱接种与超净工作台相比较，工作时人要感觉舒适得多。污染率也是很低的，操作熟练后几乎没有什么污染发生。接种后愈伤组织分化、小苗分化、生长状态与在超净台上接种的没有什么两样。
培养
在家庭的业余条件下培养培养的条件不可能得到专控，所以要充分的利用自然条件，接种后的培养瓶可以放在有较强散射光的地方，如靠窗的书柜、写字台上，但要避免日光直射，一般室温在22－28摄氏度时都能正常生长，不是特殊的品种不需要特殊的护理。如室温太低，可以用纸板、木条、塑料薄膜做一个简单的培养箱，里面装一两个15－25瓦的白织灯，既可以补助光照也可以提高培养的温度。夏天温度过高时，有条件的可以摆放在空调室内，，没有空调室的，降温虽然困难一些，但大多数试管苗是可以耐受的，不至于死去。小苗长出后，摆放在书柜或工作台上，感到自己培养出来的生机勃勃的小生灵，无疑是一种享受。
栽培
当小苗长到一定的时候，就可以配置一些生根配养基将小苗转移培养生根，待长出一定根系时，就可以出瓶种植了。小苗出瓶种植的时候一定要注意以下几个方面，一是要适当降低温度；二是要增大湿度；三是要严格控制杂菌危害；四是要保证种植介质的疏松透气；五是要保证适当的光照。我通常是用跖石、木屑、稻谷壳混合作基质，把小苗种植后用百菌清喷雾浇根，盖上塑料薄膜，少量的小苗干脆用玻璃杯盖住，大约15天后就能揭去覆盖物，便可进行正常管理了。
家庭开展组培其实也并不是一件什么很困难的事情，只要多开动脑筋，多想一些办法，做起来也是很容易地。万事开头难，办法总比困难多。我1974年在一个县烤烟研究所里当所长，原来条件不允许，科研经费很紧张，刚开始的时候，一年的科研经费只有3000元，那年我做过烟草的花药单倍体、水稻花药培养、柑桔胚乳培养、黑皮果蔗茎尖组织培养、田三七愈伤组织培养、黑节草（石斛）种子的无菌培养、体细胞融合，都获得了很好的成绩，我们就是用这种方法做的，当时北京、上海很多的研究单位来看了很吃惊，他们认为很珍贵的组培小苗，被我们丢得到处都是，觉的不可思议，他们做不出来的，竟然在我们一个十分闭塞的山区里可以做出来。我说这个话的意思不是为自己吹嘘摆功，而是告诉想从事这个行业的朋友，不要自己把自己的能量看得太低，也不要迷信权威、只要自己有信心，严格地按照科学的规律去做，没有什么做不了的，没有什么办不到的。
家庭组培培养基的选择与效果评价
选择合适的培养基是植物组织培养成功的基础。
选择合适的培养基主要从以下两个方面考虑：一是基本培养基；二是各种激素的浓度及相对比例。
MS培养基适合于大多数双子叶植物，B5和N6培养基适合与许多单子叶植物，特别是N6培养基对禾本科植物小麦、水稻等很有效，White培养基适合于根的培养。
首先试用这些培养基进行初步实验，可以少走弯路，大大；减少时间、人力和物力的消耗。当通过一系列初试之后，可再根据实际情况对其中的某些成分做小范围调整。
在进行调整时，以下情况可供参考。一是当用一种化合物作为氮源时，硝酸盐的作用比铵盐好，但单独使用硝酸盐会使培养基的PH向碱性方向漂移，若同时加入硝酸盐和少量铵盐，会使这种漂移得到克服。二是当某些元素供应不足时，培养的植物会表现出一些症状，可根据症状加以调整，如氮不足时，培养的组织常表现出花色苷的颜色（红、紫红色），愈伤组织内部很难看到导管分子的分化；当氮、钾或磷不足时，细胞会明显过度生长，形成一些十分蓬松，甚至呈透明状的愈伤组织；铁、硫缺少时组织会失绿，细胞分裂停滞，愈伤组织出现褐色衰老症状；缺硼时细胞分裂趋势缓慢，过度伸长；缺少锰或钼时细胞生长受到影响。
培养基外源激素的作用也会使培养物出现上述一些类似的情况，所以应仔细分析，不可轻易下结论。
如何在家里做植物的组织培养？
家庭组织培养
植物的组织培养没有最基本的条件和物品是搞不成的，当时合理的利用一些最简单的用具也并非无法办到。
一、最必需的物品
1、.家用高压锅 1个最好大一点的，装的东西多一点。用于培养基、无菌水等的消毒
2、接种箱 （无菌箱）1个 ，需要自己自制，用一些木板和一块玻璃和二尺布料。用于接种和转移。
3、药用天平1架 最好是500g称量的，小一点也可以，主要用来称琼脂、糖等物品。
4、不锈钢锅或铝锅（煮汤、面条的那种）买。用于煮制培养基用的。
5、搅拌和分装培养基用的调羹一个，用于煮制和分装培养基。
6、培养用的瓶子若干，
7、制棉塞用的棉花、纱布和线若干，用于做瓶口的塞子，要注意的是，棉花要使用普通做棉衣的棉花，不要用医院用的脱脂棉，这样容易穿塞污染。
8、牛皮纸、橡皮圈若干，用于包瓶头和扎包头纸用。
9、酒精灯1盏、解剖刀1把，刀片若干、镊子2把、10ml、100ml量筒各一个，2ml移液管1只、药棉若干。
二、怎样解决蒸馏水和基本药品
培养基的用水在一般人的心目总是觉的十分重要的，其实是多余的担心。冷开水、清洁的河水都是给以用的，并不影响培养的效果。市场上出售的纯净水更是一般培养基理想的用水。最常用、最必要、用量最大的只需购买以下几种就行了。
1、MS培养基的大量元素（家庭或所谓袖珍组培室的培养一般采用MS基就可以了。）共5种。也可以买市售的MS培养基
（1）、硝酸铵
（2）、硝酸钾
（3）、 氯化钙
（4）、硝酸镁
（5）、磷酸二氢钾
2、酒精
3、精密试纸（PH 5.4－7.0）
4、漂白粉或漂白精
5、琼脂
6、白糖
7、福尔马林
8、高锰酸钾（可以到医院或药材商店去买）
9、微量元素、铁盐、维生素类以及激素类药品应用量极少。比如一些激素、维生素类的药品及有针剂也有片剂，他们都有比较准确的含量，你可以去按你的需要去配制比例。
爱好者在家庭环境下进行组织培养的探讨与建议植物组织培养技术，尤其是快速繁殖，并非只有专业人员和专业实验室才能够完成的。作为对多肉植物和组织培养有着浓厚兴趣的爱好者，在充分利用家庭条件的基础上，同样可以制备出自己的试管苗来的。在我们进行多肉植物的栽培中认识到，一些比较名贵的园艺品种，比如：万象、玉扇、寿、高纹鹰爪等十二卷属品种，还是缤纷橄榄、何鲁牵牛等块茎类植物，甚至于星球属、岩牡丹属等等，这些植物的常规繁殖系数很低，他们都可以采用组织培养来解决其繁殖问题，并且可以得到相当数量的幼苗。对于奇想天外等种子萌发困难的植物，同样可以借助组织培养来进行无菌播种。在进行组织培养过程中，不但可以对培养的植物有更深一层的认识，对常规的栽培有着相当大的意义。许多搞组织培养的专家，最初都不是专业学组培的，就是凭着兴趣和探索精神取得辉煌成绩的。关键是，爱好者有着浓厚的兴趣，非凡的观察力和细致入微的操作，这些都可以弥补非专业的缺陷，并且可以充分利用日常生活中的各种可利用资源，这些就足以让爱好者在家庭环境下完成组织培养了。同时这也不仅仅满足了自己的兴趣，还可以有一定的经济收益，甚至可以有所创新和发明。
一、如何解决场地和基本设备：
进行组织培养，没有一定的设备是无法开展的。正规实验室的组织培养设备是昂贵的，不适合家庭消费，但如果能有途径买到廉价的实验室设备，那就在好不过了。如果没有办法搞到实验室设备，就不妨动手自己制作一些简单的设备。
1.无菌操作的主要设备——接种箱和压力锅：
接种箱：植物组织培养的主题操作需要在一个相对密闭的无菌环境中进行。那么说我们首先要创造一个密闭的环境，可以利用一些木料、塑料板、有机玻璃、铝合金骨架等等廉价的材料，动手粘合一个小巧的接种箱。具体的参数可以找一本“食用菌栽培”的书籍，模仿种蘑菇的接种箱做一个即可。需要注意的是，组织培养的接种箱的密闭性要求比较高，尽量避免腐朽的木材和易生锈的材料，箱子的顶端按放两盏灯：20w的紫外线灯和20w的日光灯。箱体的周边尽量采用玻璃材料，因为这样便于观察，有时候接种箱还可以借用为培养箱，周边采用玻璃材料更方便于观察和培养。
高压锅：主要用来对培养基和其他材料的灭菌。在实验室通常使用医用高压灭菌器，然而在家庭要充分利用厨房使用的高压锅，高压锅的压力要低于灭菌器，但是适当延长灭菌时间，还是可以取得较好的效果的。比如：对培养基灭菌40分钟就基本上可以达到灭菌效果（灭菌器是20分钟）；无菌水采用间歇灭菌法，先用高压锅压40分钟，放置24小时，再压20分钟即可达到效果。
2.场地：
这个就因人而易了，总体的要求就是进行组织培养操作的地方要尽量无尘，减少空气流动，最好有一定的阳光。比如书房、写字间都可以用来进行无菌操作。
进行培养基的配制可以借用一下厨房，但所使用的器具必须和厨具分开。一般说，组织培养中的几乎全部化学物质对人体是无害的，除了少数激素类物质和灭菌剂。对于有毒害的物质，需要认真保管，以免发生危险。
3.辅助设备：
主要指冰箱，它是用来储存化学物质和培养基的。天平，可以采用感量在100克的托盘天平，甚至用中药的药衡都可以代替。培养架，这个就更简单了，采用铝合金-玻璃的培养箱既可以满足要求，如果日光不足，可配合日光灯补光等。
4.化学试剂：
化学试剂是不可缺少的，因为组织培养的核心就是培养基的成分，而并不是简单的无菌操作。一些用量较大的化学物质是有必要买的，比如大量元素（硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙等）、高锰酸钾、甲醛、酒精、白砂糖、琼脂等等。微量元素和有机复合物不需要购买，因为它们的用量很小，我们可以用蔬菜浸汁或者马铃薯浸汁来代替。激素是必不可少的，他们的称量需要借助分析天平，但这是家庭条件所不允许的，如果有条件可以借助关系单位代替配成母液，每次取一些使用即可。最好的办法是到农资商店（卖农药化肥的地方），它们一般出售农业用的激素，有的是用安瓿装的，按照一定的比例加入到培养基当中即可。近几年来，有些化学品公司开始生产植物组织培养基原粉，只需要称取一定量加水即可，很方便。比如泛生化学品公司生产的ms原粉，只需要称量40克，加1升水，用微波炉加热5分钟即可分装，相当简便。
消毒剂通常采用氯化汞（剧毒），如果不容易搞到，可以用漂白粉代替。
调节酸碱度时，可以采用家庭常用的纯碱和白醋。
5.培养容器和玻璃仪器：
组织培养的容器要求并不高，只要玻璃颜色为透明色即可（钠玻璃不可以）。
我们可以到垃圾站去看看，捡回一些废旧的果酱瓶就可以了。比较好用的是阿香婆辣酱瓶，我们实验室也是采用的这种瓶子。瓶子的封口膜采用聚丙烯塑料即可，如果不好找到，可以采用微波炉专用的锡箔纸甚至方便面的袋子，折叠成双层，用橡皮圈固定即可。
其它玻璃仪器，比如烧杯、玻璃棒都可以用家庭的杯子和筷子代替；一些度量仪器，如量筒和移液管最好到玻璃仪器商店购买，恐怕花不了20元钱就可以配置一套相当棒的组培玻璃仪器。
6.其它：
还有一些用品是必需的。比如精密ph试纸（5.4~7.0），需要买一本，大约花1.5元即可搞定；酒精灯也不需要买，用墨水瓶配上一个玻璃环，再加上一个棉花芯，最后用农夫山泉矿泉水的瓶盖做灯冒，这样的酒精灯很小巧，适合接种箱使用。刀子剪子镊子是必需的，到花市的工具摊位上，花10元钱全部搞定，注意选比较小巧的工具。
关于用水，按理说应该使用蒸馏水，但是我们家庭饮用的纯净水比蒸馏水还要纯，那么说借用一些饮用水就可以了。我们曾经采用康师傅纯净水进行动物细胞的培养，效果都是很不错的，更何况于植物细胞培养了。
以上是组织培养的基本设备和试剂，主要突出了他们相关的替代品，因为作为组织培养中的快速繁殖，它的要求是相当低的。我们的家庭培养和工厂化是不同的，工厂化生产组培苗要追求高增殖率，所以它的要求就比较精细和标准。我们的家庭培养则不需要那么准确，只要达到培养成功的目的即可。当然，如果想提高增殖倍率和试管苗的品质，必须尽量贴近实验室的用具和器材，代用品总是有一定的缺陷的。
（一）必须的设施物品及代用品
1、代用品
家庭用的电冰箱，可用于贮存培养基母液（4℃）及需低温贮存的药品（如生物调节剂）。
高压锅：它可用于培养基、无菌水、玻璃器皿及其他组培用具的消毒灭菌。如所用水硬度大可用凉白开水，进行消毒灭菌。避免被消毒灭菌物品表面结垢。
不锈钢锅或铝锅：它可用于培养基、溶化琼脂（起水浴锅作用）及组培用具消毒灭菌。
刷净的废弃食油桶：它可以用来贮存蒸馏水。
小白瓷碟：可以用于接种及盛放消毒液（若放消毒液，就不要再食用，以免中毒）。
日光灯：它可用于组培过程中光源补充。
洗净废弃的罐头瓶：它可以用于组培培养之用，代替锥形瓶、试管。
组培场地可在自己的房间内进行。在配制培养基和接种时，不要赶在家庭成员较多时进行，如室内已安装了空调，那么在初代培养和继代培养、乃至小苗过渡时均有好处。
2、自制用具
（1）接种箱的制作：组培过程中的超净工作台是很贵重的设备。如果我们用自制的接种箱来代替，就可以大大节省开支，有利于普及。
自制的接种箱的用料，可以是胶合板、纤维板、玻璃（3毫米厚）、木条（装修房屋用的龙骨），甚至可以用使纸板的包装箱（包装箱的质量要稍好一些的，如电视机的包装箱），也可以用有机玻璃。
其接种箱的大小，可以根据各自的家庭条件制作。制作太小不便于操作，但相对来说消毒容易，且占地较少；制作较大的便于操作，但消毒工作显得不易，且占地面积较多。一般来说作成70厘米长、45厘米宽。50厘米高较为合适。
（2）培养箱的制作：培养箱可代替培养室，也可以用于过渡苗使用。它可以用玻璃制作，或利用长方形鱼缸。因此，可用玻璃粘结制作。其大小可按自己家庭居室面积和组培的量来决定。
3、需购置用具
普通天平（500克）：用于称量配制培养基药品，或用称量金银、中药的戥子称，用于称量配制培养基药品、微量元素及生物调节剂；或购买微量元素及生物调节剂时，买已分装的。酒精灯1盏：用于接种时，灼烧消毒灭菌。漏斗（亦可用购买桶装食用油，所配给的漏斗）：用于分装培养基用。长镊子2把：用于接种。解剖刀2把、刀片若干：用于接种。10、50、100毫升量筒各1个：用于配制培养基用。长把牛角勺2把：用于配制培养基取药品。1、2、5毫升移液管各1个：用于配制培养基用。
耐高温塑料膜或牛皮纸：用于包扎培养瓶口及表糊自制接种箱内部棱角处。橡胶圈：用于绑扎培养瓶口。脱脂棉：用于操作人员及组培用具酒精棉球消毒。pH(5～7）试纸1本：用时可剪成小条检测培养基pH值。酒精1瓶：用于酒精灯及消毒。漂白粉1瓶：用于消毒。福尔马林1瓶：用于接种箱消毒（在每次操作前2～10小时，将10～20毫升福尔马林倒入小白瓷碟内，在操作前取出）。MS培养基所需药品；用于配制培养基。盐酸及氢氧化钠：用于调pH值。如若购置1盏紫外灯，进行室内及接种箱消毒更为理想。
（二）操作时注意事项
家庭操作与单位不同，因而要注意以下事项：要注意安全，妥善保管药品。特别对老人和小孩；操作时要消毒仔细严格，接种时操作人员戴好口罩、工作帽，避开电风扇及大风沙天气，家庭成员多时避免操作；消毒前后避免家庭所养宠物进人工作间；药品称量要准确无误；如果家庭不具备温度调控（如调温空调），应避免在盛夏、寒冬进行；红掌组培要一步步来作，可先作容易组培的花卉，待取得经验后再做难作的花卉。
1.培养容器和玻璃仪器的准备：
进行培养基的配制首先要准备好培养瓶和配制使用的玻璃仪器。培养瓶一般使用各种果酱瓶，要先用洗洁精浸泡瓶子4~8小时，再用流水冲洗数次。其他的玻璃仪器同样需要这样清洁，直到玻璃壁上不挂水珠而是成为水膜为止。清洗完毕的玻璃容器要倒扣，空去瓶内的水。
清洗干净的容器要注意防尘，尽量放置在玻璃柜中。更简单的是用干净的毛巾将容器盖住。
移液管要用吸球来清洗，反复用蒸馏水吹吸直到洁净为止，将移液管放置在一个长筒中，便于使用。一般移液管只能使用一次，即要清洗，所以有多必要准备几只移液管，建议：10ml/2支，5ml/2支，1ml/5支。
2.培养基的配制：
经典的组织培养用培养基是ms配方，其基本上划分为：大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、植物激素、糖和支持物。这些成分的用量都在毫克级，用普通天平是难以称量的，为了解决这个问题，我们可以按比例放大各成分的用量配制成母液，使用的时候按一定比例加入即可。
下面将一种ms培养基的母液配制方案公布如下：
大量元素：硝酸铵66.0克；
硝酸钾76.0克；
无水氯化钙13.3克；
七水硫酸镁14.8克；
磷酸二氢钾6.8克。
以上分别溶解后合并定容到1升，每配制1升标准ms培养基取25毫升。
铁盐：七水硫酸亚铁5.56克；
乙二胺四乙酸二钠（edtana）7.46克。
以上两种分别加热溶解，混合，定容到1升，调整ph到5.5以下，每配制一升ms取5毫升。
微量元素和有机复合物的用量过于微小，为了简便我们可以用蔬菜提取液或者马铃薯提取液代替。通常我们习惯用100克菠菜加100ml的水煮沸10分钟，过滤留滤液，每配制1升ms培养基加入20~50毫升提取液。同样也可以使用带皮马铃薯100克加200毫升水煮沸15分钟，过滤留滤液，每升ms加入50~100毫升即可。
加入上述各组分后，每升ms培养基还需要加入白砂糖30克，琼脂7克。
这里要说明的是，糖和琼脂都是可变的量，要根据需要调整。另外制作果冻用的卡拉胶也可以代替琼脂，透明度更好。
上述各成分加入后，定容到800毫升左右，用微波炉加热，直到琼脂全部溶解为止。此时加入所需的植物激素（通常配制成0.1%溶液，这样每取1毫升，换算到培养基中就是1ppm）。然后加水定容到1100毫升（1.1升），之所以多出0.1升是为了抵消分装和消毒中的损耗。最后用酸碱调整ph到5.8~6.0。
3.使用ms原粉配制培养基：
目前国内的一些化学品公司开发了简便的ms培养基原粉，大大简便了培养基的配制，根据不同公司的说明选择培养基的种类。下面就以ms原粉为例： ms培养基原粉，包括了大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、糖和琼脂，一般按使用方法称量，微波炉加热溶解，加入激素，定容到1100毫升（1.1升），调整ph值到5.8~6.0。
4.分装：
将配制好的培养基分装在培养容器中，注意要趁热分装，因为琼脂在40度以下就会凝固。每个培养瓶装培养基大约是瓶容积的1/6~1/5，注意不要将培养基挂在瓶的外壁，这样容易造成污染。分装后用聚丙烯薄膜或着方便面的袋子封口，用胶圈固定（胶圈尽量选择自行车的内胎，这种胶圈比较耐热）。
5. 灭菌：
采用家庭压力锅消毒，建议到医疗器械用品商店买一些“灭菌效果试纸”，它们可以指示灭菌效果，当灭菌达到效果时会变色。把试纸和培养基同时放入锅内，加热到有大量蒸汽冒出，再加上压力伐，维持小火30~40分钟。
灭菌完毕后自然冷却，将培养基取出，放在阴凉无尘处备用。
6. 接种箱的准备：
新制作的接种箱必须要清洁干净，尽量做到无死角。每次使用前2小时，将操作所需要的全部物品放入接种箱，再用一个小烧杯加入3~5克高锰酸钾放入接种箱内，在箱内向烧杯中倒入2~3毫升的甲醛溶液，大约几秒钟后会看到甲醛蒸汽出现，这样可以对接种箱内的所有物品进行初次消毒；同时打开紫外线灯照射。紫外线灯是高电压穿激汞蒸汽产生的，紫外线进行第二道灭菌，在紫外线照射大约15分钟后，会激发氧气形成臭氧，臭氧作为第三道灭菌防线，这样经过三次灭菌，接种箱基本上可以达到无菌标准。
在操作前15分钟内，向刚才蒸发甲醛用的烧杯中倒入5毫升浓氨水，因为甲醛对人体有毒害作用，氨水可以和甲醛形成一种叫做“六亚甲基四胺”的固体物质，从而中和了甲醛的刺激性蒸汽。这个时候紫外灯不要关掉，要继续照射，直到操作前5分钟关闭，维持黑暗5分钟，然后再打开日光灯进行操作。维持5分钟黑暗的原因是，紫外光对微生物的杀灭是作用于dna的胸腺嘧啶，形成四聚体，但是微生物具有一种光复活蛋白，可以在有可见光的环境下还原胸腺四聚体，而使微生物复活，这个作用叫做“光复活作用”，所以在关掉紫外灯后必须维持黑暗几分钟，避免光复活作用的出现。
怎样在家庭开展组培工作
制备
家庭组培因受到条件的限制，不可能配置大量的配养基，，一般每次配置1升为宜。煮制后用PH试纸测定后，分装成35－40瓶，塞好棉塞，包好包头纸。（棉塞一定要用作棉衣的棉花卷制，不能使用脱脂棉，然后用纱布包紧，用棉线扎好。棉塞的松紧以手提棉塞瓶子不滑落为宜。）然后放入高压锅里高压灭菌，待高压锅喷嘴喷出蒸汽时，扣上压力阀，从压力阀喷气时起计时，连续维持15－20分钟后关火，压力消失后，打开锅盖，取出配养基，放入接种箱内待用。初次实验时，灭菌后的培养基应放置三五天后，观察无霉菌生长时才能使用。如有霉菌长出，这说明灭菌时间不够，，需要适当增加灭菌时间。
接种
将灭菌后的配养基、无菌水、消毒药水及使用的器材放入接种箱内，因接种箱内的体积相对较小，所以所用的一切物品都要有序地摆放在相应的位置上，不能随意摆放，箱内湿度较大，点酒精灯一定要是用打火机，不要使用火柴。要特别注意准备好装污水、污物的容器，尽可能地大一些，因为操作时是不容许开箱取物的。把所有的物品放置好以后，将一装有10－20ml福尔马林的磁杯放入箱内（最好不要使用玻璃杯，因反应时温度较高，容易炸裂。），倒入2－5g高锰酸钾（PP粉），使其蒸气充满箱内，达到灭菌的效果。这时要将接种箱的通气孔和操作孔封闭好，避免甲醛蒸气很快散尽。待箱内蒸气散尽后，才能开始接种工作，这段时间大约需要5－10个小时。
接种时，揭去密封在接种箱通气孔和操作孔上的密封物，取出熏蒸用的磁杯，将接种用的材料送入接种箱内，开启紫外线灯，十五分钟后关闭紫外线灯，开启照明灯，即可开始工作。操作时一定要树立无菌观念，要把一切物品都看成是带菌的，要时时都注意防范。工作是由于箱内温度较高，湿度较大，手容易出汗，所以每接种一瓶后都要用酒精擦拭手指，也可以戴指套。另外，操作时要注意防火，由于空间较小，一不小心就容易烧伤手指或引起酒精起火。打开瓶塞时，要将瓶口置于酒精灯上方，用右手的无名指和小指夹住棉塞尾，轻轻将棉塞拔出，棉塞不能置于箱内物品上，应用手指夹住，接种后，将瓶口在酒精灯上烧灼一下，棉塞也烧灼一下，，然后在酒精灯火焰上方轻轻塞好，扎好包头纸，用铅笔标明品种、接种日期、编号等，然后重复下一瓶。
其实，用接种箱接种与超净工作台相比较，工作时人要感觉舒适得多。污染率也是很低的，操作熟练后几乎没有什么污染发生。接种后愈伤组织分化、小苗分化、生长状态与在超净台上接种的没有什么两样。
培养
在家庭的业余条件下培养培养的条件不可能得到专控，所以要充分的利用自然条件，接种后的培养瓶可以放在有较强散射光的地方，如靠窗的书柜、写字台上，但要避免日光直射，一般室温在22－28摄氏度时都能正常生长，不是特殊的品种不需要特殊的护理。如室温太低，可以用纸板、木条、塑料薄膜做一个简单的培养箱，里面装一两个15－25瓦的白织灯，既可以补助光照也可以提高培养的温度。夏天温度过高时，有条件的可以摆放在空调室内，，没有空调室的，降温虽然困难一些，但大多数试管苗是可以耐受的，不至于死去。小苗长出后，摆放在书柜或工作台上，感到自己培养出来的生机勃勃的小生灵，无疑是一种享受。
栽培
当小苗长到一定的时候，就可以配置一些生根配养基将小苗转移培养生根，待长出一定根系时，就可以出瓶种植了。小苗出瓶种植的时候一定要注意以下几个方面，一是要适当降低温度；二是要增大湿度；三是要严格控制杂菌危害；四是要保证种植介质的疏松透气；五是要保证适当的光照。我通常是用跖石、木屑、稻谷壳混合作基质，把小苗种植后用百菌清喷雾浇根，盖上塑料薄膜，少量的小苗干脆用玻璃杯盖住，大约15天后就能揭去覆盖物，便可进行正常管理了。
家庭开展组培其实也并不是一件什么很困难的事情，只要多开动脑筋，多想一些办法，做起来也是很容易地。万事开头难，办法总比困难多。我1974年在一个县烤烟研究所里当所长，原来条件不允许，科研经费很紧张，刚开始的时候，一年的科研经费只有3000元，那年我做过烟草的花药单倍体、水稻花药培养、柑桔胚乳培养、黑皮果蔗茎尖组织培养、田三七愈伤组织培养、黑节草（石斛）种子的无菌培养、体细胞融合，都获得了很好的成绩，我们就是用这种方法做的，当时北京、上海很多的研究单位来看了很吃惊，他们认为很珍贵的组培小苗，被我们丢得到处都是，觉的不可思议，他们做不出来的，竟然在我们一个十分闭塞的山区里可以做出来。我说这个话的意思不是为自己吹嘘摆功，而是告诉想从事这个行业的朋友，不要自己把自己的能量看得太低，也不要迷信权威、只要自己有信心，严格地按照科学的规律去做，没有什么做不了的，没有什么办不到的。
家庭组培培养基的选择与效果评价
选择合适的培养基是植物组织培养成功的基础。
选择合适的培养基主要从以下两个方面考虑：一是基本培养基；二是各种激素的浓度及相对比例。
MS培养基适合于大多数双子叶植物，B5和N6培养基适合与许多单子叶植物，特别是N6培养基对禾本科植物小麦、水稻等很有效，White培养基适合于根的培养。
首先试用这些培养基进行初步实验，可以少走弯路，大大；减少时间、人力和物力的消耗。当通过一系列初试之后，可再根据实际情况对其中的某些成分做小范围调整。
在进行调整时，以下情况可供参考。一是当用一种化合物作为氮源时，硝酸盐的作用比铵盐好，但单独使用硝酸盐会使培养基的PH向碱性方向漂移，若同时加入硝酸盐和少量铵盐，会使这种漂移得到克服。二是当某些元素供应不足时，培养的植物会表现出一些症状，可根据症状加以调整，如氮不足时，培养的组织常表现出花色苷的颜色（红、紫红色），愈伤组织内部很难看到导管分子的分化；当氮、钾或磷不足时，细胞会明显过度生长，形成一些十分蓬松，甚至呈透明状的愈伤组织；铁、硫缺少时组织会失绿，细胞分裂停滞，愈伤组织出现褐色衰老症状；缺硼时细胞分裂趋势缓慢，过度伸长；缺少锰或钼时细胞生长受到影响。
培养基外源激素的作用也会使培养物出现上述一些类似的情况，所以应仔细分析，不可轻易下结论。
植物组织培养的三种途径
植物组织培养的三种途径有：1、胚胎培养从胚珠中分离出来的成熟或未成熟胚为外植体的离体无菌培养。2、器官培养以植物的根、茎、叶、花、果等器官为外植体的离体无菌培养，如根的根尖和切段，茎的茎尖、茎节和切段，叶的叶原基、叶片、叶柄、叶鞘和子叶，花器的花瓣、雄蕊（花药、花丝）、胚珠、子房、果实等的离体无菌培养。3、细胞培养以单个游离细胞（如用果酸酶从组织中分离的体细胞，或花粉细胞，卵细胞）为接种体的离体无菌培养。植物组织培养意义：1、组织培养是研究植物生长和分化规律的重要手段，组织培养是在人工控制条件下培养外植体再生器官或植株的技术，可以在不受植株体其它部分干扰下研究被培养部分生长和分化的规律，并可以利用各种培养条件影响它们的发育进程。2、组织培养是开展生物工程的基本技术，各种基因转移和基因重组技术是组织培养基础上建立的。3、组织培养可快速繁殖植物种苗，目前组织培养在无性系的快速繁殖、无病毒种苗培育、新品种的选育、人工种子和种质保存、药用植物和次生物质的工业化生产等方面的应用已十分广泛。
无菌培养体系的建立方法（植物生物技术）,请给出简单具体的步骤,
番木瓜组织培养无菌体系的建立 番木瓜株性复杂、遗传高度杂合,用常规种子繁殖很难保持株性一致,同时,番木瓜环斑病毒病使其由多年生变为一年生,大大限制了番木瓜的生产和利用.通过组织培养进行无性系快速繁殖可以解决,在种苗商业化生产中已进入应用阶段.1材料与方法1.1外植体的选择、获取与预处理从田间成年健壮番木瓜植株上剪取生长有顶芽和侧芽的旺盛分枝,切除多余枝条部分,去掉叶片、叶柄,放入保鲜袋.1.2外植体的消毒方法的确定1.2.1方法Ⅰ自来水冲洗10min→饱和肥皂水浸泡20min→无菌水冲洗3次→75%酒精30s→无菌水冲洗2次→4%次氯酸钠12min→无菌水冲洗4次→消毒的滤纸上吸干水分→接种到不含山农一号溶液的培养基中.1.2.2方法Ⅱ自来水冲洗10min→饱和肥皂水20min→无菌水冲洗3次→75%酒精30s→无菌水冲洗2次→0.1%升汞10min→4%次氯酸钠8min→无菌水冲洗4次→消毒的滤纸上吸干水分→接种到不含山农一号溶液的培养基中.1.2.3方法Ⅲ自来水冲洗10min→饱和肥皂水20min→无菌水冲洗3次→75%酒精30s→无菌水冲洗2次→0.1%升汞10min→无菌水冲洗.
濮云飞
培养基，培养器皿和植物材料通常怎样灭菌
常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类，即：物理方法如干热（烘烧和灼烧）、湿热（常压或高压蒸煮）、射线处理（紫外线、超声波、微波）、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施；化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏水、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。这些方法和药剂要根据工作中的不同材料不同目的适当选用。
1、培养基用湿热灭菌
培养基在制备后的24小时内完成灭菌工序。高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.1mpa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。
注意完全排除锅内空气，使锅内全部是水蒸气，灭菌才能彻底。高压灭菌放气有几种不同的做法，但目的都是要排净空气，使锅内均匀升温，保证灭菌彻底。常用方法是：关闭放气阀，通电后，待压力上升到0.05mpa时，打开放气阀，放出空气，待压力表指针归零后，再关闭放气阀。
关阀再通电后，压力表上升达到0.1mpa时，开始计时，维持压力0.1-0.15mpa，20分钟。
按容器大小不同，保压时间有所不同。见表1。该表所列数字是彻底灭菌很保险的数字，如果容器体积较大，但是放置的数量很少，也可以减少时间。
表1. 培养基高压蒸汽灭菌所必需的最少时间
容器的体积/ml
在121℃灭菌所需最少时间/min
20-50
15
75-150
20
250-500
25
1000
30
到达保压时间后，即可切断电源，在压力到0.5mpa，可缓慢放出蒸汽，应注意不要使压力降低太快，以致引起激烈的减压沸腾，使容器中的液体四溢。当压力降到零后，才能开盖，取出培养基，摆在平台上，以待冷凝。不可久不放气，引起培养基成分变化，以至培养基无法摆斜面。一旦放置过久，由于锅炉内有负压，盖子打不开，只要将放气阀打开，大气压入，内外压力平衡，盖子便易打开了。
对高压灭菌后不变质的物品，如无菌水、栽培介质、接种工具，可以延长灭菌时间或提高压力。而培养基要严格遵守保压时间，既要保压彻底，又要防止培养基中的成分变质或效力降低，不能随意延长时间。
对于一些布制品，如实验衣、口罩等也可用高压灭菌。洗净晾干后用耐高压塑料袋装好，高压灭局20-30分钟。
高压灭菌前后的培养基，其ph值下降0.2-0.3单位。高压后培养基ph值的变化方向和幅度取决于多种因素。培养基中成分单一时和培养基中含有高或较高浓度物质时，高压灭菌后的ph值变化幅度较大，甚至可大于2个ph值单位。环境ph值的变化大于0.5单位就有可能产生明显的生理影响。
高压灭菌通常会使培养基中的蔗糖水解为单糖，从而改变培养基的渗透压。在8%-20%蔗糖范围内，高压灭菌后的培养基约升高0.43倍。
培养基中的铁在高压灭菌时会催化蔗糖水解，可使15%-25%的蔗糖水解为葡萄糖和果糖。培养基值小于5.5，其水解量更多，培养基中添加0.1%活性炭时，高压下蔗糖水解大大增强，添加1%活性炭，蔗糖水解率可达5%。
为防止高压灭菌产生的上述一些变化可用下列方法：
（1）经常注意搜集有关高压灭菌影响培养基成分的资料，以便及时采取有效措施。
（2）设计培养基配方时尽量采用效果类似的稳定试剂并准确掌握剂量。如避免使用果糖和山梨醇而用甘露醇，以IBA代替IAA，控制活性炭的用量（在0.1%以下）注意ph值对高压灭菌下培养基中成分的影响等。
（3）配制培养基时应注意成分的适当分组与加入的顺序。如将磷、钙和铁放在最后加入。
（4）注意高压灭菌后培养基ph值的变化及恢复动态。如高压灭菌后的ph值常由5.8升高至6.48。而96小时后又会降至5.8左右。这样在实验中就可以根据这一规律加以掌握。
2、用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌
在无菌操作时，把镊子、剪刀、解剖刀等浸入95%的酒精中，使用之前取出在酒精灯火焰上灼烧灭菌。冷却后，立即使用。操作中可采用250或500毫升的广口瓶，放入95%的酒精，以便插入工具。
3、玻璃器皿及耐热用具采用干热灭菌
干热灭菌是利用烘箱加热到160-180℃的温度来杀死微生物。由于在干热条件下，细菌的营养细胞的抗热性大为提高，接近芽孢的抗热水平，通常采用170℃持续90分钟来灭菌。干热灭菌的物品要预先洗净并干燥，工具等要妥为包扎，以免灭菌后取用时重新污染。包扎可用耐高温的塑料。灭菌时应渐进升温，达到预定温度后记录时间。烘箱内放置的物品的数量不宜过多，以免防碍热对流和穿透，到指定时间断电后，待充分冷凉，才能打开烘箱，以免因骤冷而使器皿破裂。干热灭菌能源消耗太大，浪费时间。
4、不耐热的物质采用过滤灭菌
一些生长调节剂，如赤霉素、玉米素、脱落酸和某些微生物是不耐热的，不能用高压灭菌处理，通常采用过滤灭菌方法。
一些化学成分在高温高压下会发生降解而失去效能或降低效能。经高温灭菌后赤霉素GA3的活性仅及不经高温灭菌的新鲜溶液的10%。蔗糖经高温后部分被降解成d-葡萄糖和d-果糖，果糖又可被部分水解，产生抑制培养的植物组织生长的物质。高温还可使碳水化合物和氨基酸发生反应。维生素具有不同程度的热稳定性，但如果培养基的ph值高于5.5，则维生素b1会被迅速降解。泛酸钙、植物组织提取物等要过滤灭菌，不能高温灭菌，否则会失去作用。
防细菌滤膜的网孔的直径为0.45微米以下，当溶液通过滤液后，细菌的细胞和真菌的孢子等因大于滤膜直径而被阻，在需要过滤灭菌的液体量大时，常使用抽滤装置；液量小时，可用注射器。使用前对其高压灭菌，将滤膜装在注射器的靠针管处，将待过滤的液体装入注射器，推压注射器活塞杆，溶液压出滤膜，从针管压出的溶液就是无菌溶液。
过滤除菌操作步骤：首先将过滤器、接液瓶用纸包好，滤膜可放在培养皿内用纸包好。使用前先经121℃高压蒸汽灭菌30分钟；在超净工作台上，将滤器装置装好，用灭菌无齿镊子将滤膜安放在隔板上，滤膜粗糙面向上；然后将待除菌的液体注入滤器内，开动真空泵即可过滤除菌。滤液经培养证明无菌生长后可保存备用。
5、空间采用紫外线和熏蒸灭菌
（1）紫外线灭菌在接种室、超净台上或接种箱用紫外灯灭菌。紫外线灭菌是利用辐射因子灭菌，细菌吸收紫外线后，蛋白质和核酸发生结构变化，引起细菌的染色体变异，造成死亡。紫外线的波长为200-300nm，其中260nm的杀菌能力最强，但是由于紫外线的穿透能力很弱，所以只适于空气和物体表面的灭菌，而且要求距照射物以不超过1.2米为宜。
（2）熏蒸灭菌用加热焚烧、氧化等方法，使化学药剂变为气体状态扩散到空气中，以杀死空气和物体表面的微生物。这种方法简便，只需要把消毒的空间关闭紧密即可。
化学消毒剂的种类很多，它们使微生物的蛋白质变性，或竞争其酶系统，或降低其表面张力，增加菌体细胞浆膜的通透性，使细胞破裂或溶解。一般说来，温度越高，作用时间越长，杀菌效果越好。另外，由于消毒剂必须溶解于水才能发挥作用，所以要制成水溶状态，如升汞与高锰酸钾。还有消毒剂的浓度一般是浓度越大，杀菌能力越强，但石炭酸和酒精例外。
常用熏蒸剂是甲醛，熏蒸时，房间关闭紧密，按5-8ml/m3用量，将甲醛置于广口容器中，加5g/m3高锰酸钾氧化挥发。熏蒸时，房间可预先喷湿以加强效果。冰醋酸也可进行加热熏蒸，但效果不如甲醛。
6、一些物体表面用药剂喷雾灭菌
物体表面可用一些药剂涂搽，喷雾灭菌。如桌面、墙面、双手、植物材料表面等，可用75%的酒精反复涂搽灭菌，1%-2%的来苏儿溶液以及0.25%-1%的新洁尔灭也可以。
7、植物材料表面用消毒剂灭菌
从外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。这些污染源一旦带入培养基，便会造成培养基污染。因此，植物材料必须经严格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接种到培养基上，这一过程叫做接种。接种的植物材料叫做外植体（explant)。
启维益成代理的植物组培抗菌剂（PPM）它是一种广谱抗微生物剂，可以杀死细菌和真菌细胞，防止真菌孢子的萌发，并在较高浓度下能消除内源性污染的外植体。
首先，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放入为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。流水冲洗在污染严重时特别有用。
洗时可加入洗衣粉清洗，然后再用自来水冲洗洗衣粉水。洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物，除去脂质性的物质，便于灭菌液的直接接触。当然，最理想的清洗物质是表面活性物质吐温。
第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成，准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70%酒精浸泡10-30秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用，加之70%酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞，所以浸润时间不能过长。有一些特殊的材料，如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗，多层鳞片的休眠芽等等，以及主要取用内部的材料，则可只用70%酒精处理稍长的时间。处理完的材料在无菌条件下，待酒精蒸发后再剥除外层，取用内部材料。
第三步是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多，可根据情况选取1-2种使用（表2）。
表2. 常用灭菌剂使用浓度及效果比较
灭菌剂名称
使用浓度
灭菌时间/min
灭菌效果
酒精
70-75%
0.1-3
好
氯化汞
0.1-0.2%
2-10
很好
漂白粉
饱和溶液%
5-30
很好
次氯酸钙
9-10%
5-30
很好
次氯酸钠
2%
5-30
很好
过氧化氢
10-12%
5-15
好
抗菌素
4-50mg/L
30-60
较好
上述灭菌剂应在使用前临时配制，氯化汞可短期内储用。次氯酸钠和次氯酸钙都是利用分解产生氯气来杀菌的，故灭菌时用广口瓶加盖较好；升汞是由重金属汞离子来达到灭菌的；过氧化氢是分解中释放原子态氧来杀菌的，这种药剂残留的影响较小，灭菌后用无菌水漂洗3-4次即可；由于升汞液灭菌的材料，难以对升汞残毒去除，所以应当用无菌水漂洗8-10次，每次不少于3分钟，以尽量去除残毒。
灭菌时，不沥干的植物材料转放到烧杯或其他器皿中，记好时间，倒入消毒溶液，不时用玻璃棒轻轻搅动，以促进材料各部分与消毒溶液充分接触，驱除气泡，使消毒彻底。在快到时间之前1-2分钟，开始把消毒液倾入一备好的大烧杯内，要注意勿使材料倒出，倾倒干净后立即倒入无菌水，轻搅漂洗。灭菌时间是从倒入消毒液开始，至倒入无菌水时为止。记录时间还便于比较消毒效果，以便改正。灭菌液要充分浸没材料。宁可多用些灭菌液，切勿勉强在一个体积偏小的容器中使用很多材料灭菌。
在灭菌溶液中加吐温-80或triton X效果较好，这些表面活性剂主要作用是使药剂更易于展布，更容易浸入到灭菌的材料表面。但吐温加入后对材料的伤害也在增加，应注意吐温的用量和灭菌时间，一般加入灭菌液的0.5%，即在100ml加入15滴。
最后一步是用无菌水漂洗，漂洗要求3分钟左右，视采用的消毒液种类，漂洗3-10次左右。无菌水漂洗作用是免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用。
