pcr仪

时间:2024-07-09 09:15:48编辑:奇事君

PCR仪有哪些种类,如何选购?

【PCR仪的种类】
分类总是五花八门,总体来说可以分为PCR扩增仪和实时荧光PCR仪两大类,有人也把它们称为半自动和全自动,或者定性和定量,都是比较不准确的称呼。

PCR最重要的就是个升降温过程,最初的水浴锅式PCR,就是三个水浴箱,一个机械臂,定时抓出反应槽转换水浴锅。这种东东体积大,迅速慢,但其实结果并不比以后的PCR仪差,我现在都很欣赏。后来有人利用致冷和加热做成了,固定位置升降温的PCR扩增仪。


后来随着定量技术的发展,有公司将扩增仪和检测做成一体,也就成了现在所谓的全自动(或定量)PCR仪。当然标准的叫实时荧光定量PCR仪。

【品牌】

什么东西都有品牌,现在国内国外PCR仪的品牌很多,就国外而言比较著名的有:

ABI美国应用生物公司:老牌的生物公司贵族,其收购了原来的PE,而PE公司是PCR的鼻祖,旗下有很多经典的PCR仪,有5700(已停产)、7700(已停产)、7000、7900等实时荧光定量PCR仪。

ROCHE罗氏诊断:炙手可热的新贵,LIGHTCYCLER是其唯一的PCR仪,市场做得很不错,以科研定位为主,但在国内很多医院使用,其很特色离心、气加热、毛细管等,设计另类,是最有特色的PCR仪,当然好坏另议,就单其另辟蹊径的技术能力和胆识就值的佩服。


MJ:刚入中国的名流,MJ的扩增仪在生命科研领域比较出名,其产品比较适合高通量检测,人类基因组计划用得很多。其实时荧光PCR仪刚进入中国不久,孔间能使用不同温度是其特色。这点其实比较有用。

伯乐:呵,廉价的麦当劳,ICYCLER是其主打,进入中国已经比较久了,产品和5700一样,是扩增仪上加装定量模块而成,特点是价格较低。

国内现在做的也很多,比如杭州博日、杭州朗基、上海枫岭、厦门安普利等。

【选购】

准确的讲包括实时荧光定量在内都没有自动加样和标本处理系统,只能算半自动的。PCR仪是个简单的东东,一个温控设备和一个检测设备而已。

关于温控,主要是介质问题。理想的介质是导热性好、比热大、接触紧密的东东。

这方面最好的是水浴和油浴,比热大(油比水更大)、溶剂化物体,与反应物无缝接触,效果当然最好。但是自动化,小型化难,只有最初的水浴锅式使用。

硅加热,这是使用最普遍的一种,优点:易自动化、速度快、直接加热降温,效果当然好,但是第一成本较高,第二其使用的介质是金属,导热虽然好,但是与反应管,很难做到无缝接触,定性时代可以加油,但用荧光定最,由于油有荧光信号不能用。所以在无缝接触上差一些。第三由于是底部加热,下部压力较大,有溢出的可能,不过新的仪器在加热盖以后解决了这个问题。

空气加热,用空气做介质有优点,与反应体系无缝接触,但是空气的导热性差、比热小的弱点明显。因此空气加热的要利用离心来产生空气流动,增强导热性,同时使用毛细管,加大接触面积、试剂微量化来弥补。这样做了以后效果还是不错。但有的厂商把什么离心、毛细管的好处大讲特讲,对气加热的弱点闭口不谈,却是高明的市场手法。同时,使用离心,对标本量增大是有影响的并且标本量越大,空气比热小的弱点就越明显,所以空所加热的仪器标本量都比较小。使用毛细管后由于反应液与管的接触面积增大,吸附现象更大,因此试剂的通用性差一般要专门开发,成本高,虽然试剂用量少,但因为是专用试剂,每人份就是以实际量算,并不省试剂。反而增加了毛细管成本。

关于功能,所有的PCR仪功能都大体相同。只有MJ孔间能使用不同温度比较独特,这对于多项目同时检测以及循环参数的调整比较有用。但其实时荧光的仪器刚进入中国不久,具体如何还不得而知。

关于选购,根据单位情况而定,由于PCR的技术含量其实并不高,好的国产仪器如杭州博日(与日本著名厂商大和有关)也差不太多。关于进口仪器,罗氏的仪器不错,但如果标本量大,建议不要用罗氏。一则会累死的。另外,每个标本要分摊的标准曲线、对照成本太高。同时,试剂也比较受限。


PCR仪的使用方法

方法:1、将DNA加热(至90~95℃)变性, 将双股的DNA加热后转为单股DNA以做为复制的模板。2、则是令 Primers于一定的温度下(冷却至55~60℃)附着于模板DNA两端。 最后在DNA聚合酶e.g. Taq-polymerase 的作用下(加热至70~75℃)进行引物的延长 Extension of primers及另一股的合成。标准PCR仪也叫做终点PCR仪,是指目的基因仅经过预变性、变性、退火、延伸阶段产生大量的核酸序列的PCR仪,PE-Cetus公司推出的世界上第一台PCR自动化热循环仪属于此种。根据PCR退火温度和扩增条件(细胞内/外),标准PCR又可以分为三类:普通PCR、梯度PCR和原位PCR。PCR是分子生物学研究极其重要的工具,是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,基本原理是在试管中模拟细胞内的DNA复制,即人为创造核酸半保留复制条件,使目的DNA在细胞外完成扩增的过程,它可被看作是生物体外的特殊DNA复制。扩展资料1、普通PCR仪:一般把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪,称之为普通PCR仪。如果要用它做不同的退火温度则需要多次运行。主要是用作简单的、对单一退火温度的目的基因的扩增。主要应用于科研、教学、临床医学、检验、检疫等。2、梯度PCR仪:普通PCR仪衍生出的带梯度PCR功能的基因扩增仪。梯度PCR仪每个孔的温度可以在指定范围内按照梯度设置,一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(通常12种温度梯度)。由于被扩增的DNA片段不同,其最佳退火温度也不同,通过梯度设置。可一次性筛选出最佳的退火温度。这样既可节省试验时间,提高实验效率,又能节约实验成本。在不设置梯度的情况下亦可当做普通的PCR用。梯度PCR仪多应用于科研、教学机构。3、原位PCR仪:是将PCR技术的高效扩增与原位杂交的细胞定位结合起来,用于从细胞内靶DNA的定位分析的细胞内基因扩增仪,从而在组织细胞原位检测单拷贝或低拷贝的特定DNA或RNA序列。原位PCR技术的待检标本一般先经化学固定,以保持组织细胞的良好形态结构。细胞膜和核膜均具有一定的通透性,当进行PCR扩增时,各种成分,如引物、DNA聚合酶、核苷酸等均可进进细胞内或细胞核内,以固定在细胞内或细胞核内的RNA或DNA为模板,于原位进行扩增。原位PCR仪对于在分子和细胞水平上研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转变有着重要意义。参考资料来源:百度百科-PCR仪

荧光定量pcr仪有哪些品牌

之前老板想买定量PCR,顺便了解了一下情况,给大家分享。荧光定量PCR品牌目前主流的就是罗氏(Roche)、ABI、伯乐,这些平时实验室看到的较多、另外较少用的也有Aglient、Biometra、耶拿等。主流的几个品牌有些接触。
关于罗氏(Rohe)的荧光定量PCR仪,中国农大同学有用过LightCycler 480和LightCycler2.0的,罗氏的PCR最大的优势就是精准,均一性也比别的牌子的机子好,可以省时,少做几个重复。可能是技术方面做得比较前沿,不过价格是有些贵,要是资金宽裕的可以选他,有保障,省的出现假阳性实验一次次失败,还找不到原因。一份价格一分货啊!
ABI的7500,有工程师来上门介绍过,机子的外形还蛮好看的,价格比罗氏便宜,老板还一度犹豫了,后来听别的老师说售后服务有些麻烦,就算了。我们实验室没人用过,要是没个耐心的工程师指导,还不知道怎么下手。另外提醒大家一下,如果要做HRM的,ABI的温度均一性可能不够,要是做一般的定量,那是没问题的。
至于伯乐的,价格方面到也便宜,不过我看有关的文献支持不多,也就没有太多的关注。
以上只是自己了解的一点信息,希望对大家有帮助,网上相关的评论也挺多,看了能多了解一点。


实时荧光PCR仪哪家牌子好

  我推荐西安天隆自己研发的PCR仪。有基本型、梯度型、实时荧光定量等多种型号。最重要的是天隆已经在该领域有十多年的经验,是最早研发生产PCR仪的公司之一。

  西安天隆生产民族品牌PCR仪已有十年历史,是国内唯一具有定性、终点定量、实时定量PCR仪三个医疗器械注册证和CE认证的民族品牌。其生产的PCR仪在国产同类产品中累计销量第一。也是国家强制性行业标准2006年实施以来首家通过检测并获得SFDA注册证的国产实时PCR仪。实时PCR仪国家发明专利(ZL2004.1.0073432.1)已获授权,产品已获省部级科技成果二等奖及国家重点新产品证书,以PCR为代表的实验室设备已出口韩国、巴基斯坦、沙特等多个国家。
  03年以来,西安天隆利用其自身的研发实力与西安交通大学、浙江大学、德国威廉港大学、中科院电子所等产学研协作,相继承担了西安市、陕西省重大技术创新及国家中小企业创新基金等多项科研项目,如“公共场所特定病毒(如SARS)快速采样及定量分析评估系统”;“柔性照明低误差芯片阅读仪”(国科发计字[2004]460号);“用于疾病分子诊断的实时荧光定量PCR核酸检测仪及配套试剂的产业化(2007ZKC06-05)”等。公司已成为西安市高技术产业化示范工程和西安市生命科学仪器工程实验室。2007年底又传来喜讯,西安天隆科技有限公司牵头承担的重大疾病PCR分子诊断仪国家重点研究项目已获国家批复,以上充分证明了西安天隆在我国生物医学仪器研发及产业化中的主导地位。


  PS:进口的仪器是很贵,现在国内的水平也不错,都是经过反复验证的。我们要相信国产的东西会越来越好滴~


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