介绍几种检测基因表达水平的方法
1 western bloting
a.将编码目标蛋白基因通过载体进行体外重组，然后导入宿主细胞表达
b.将目标蛋白注入兔子或其他动物体内获得一抗
c.将样品蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳、转移、吸附固定
d.用一抗与之杂交再用二抗检测其是否表达
2 fluorescent real-time PCR
a.提取样品总RNA，再通过超速离心获得mRNA
b.用逆转录酶获得cDNA
c.加入特异性探针
d.利用专门的仪器检测荧光强度即可
3半定量 PCR
a.提取样品总RNA，再通过超速离心获得mRNA
b.用逆转录酶获得cDNA
c.做半定量PCR
4cDNA microarray
5蛋白质 芯片
实质就是高通量的分子杂交，免疫酶连反应再运用计算机处理
检测基因表达的方法有哪些
主要用探针检测mRNA或用抗体检测出表达的蛋白质(转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测)一、外源基因转录水平的鉴定基因表达分为转录及翻译两阶段，转录是以DNA（基因）为模板生成mRNA的过程，翻译是以mRNA为模板生成蛋白质的过程，检测外源基因的表达就是检测特异mRNA及特异蛋白质的生成。所以基因表达检测分为两个水平。即转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测。转录水平上的检测主要方法是Northern杂交，它是以DNA或RNA为探针，检测RNA链。和Southern杂交相同，Northern杂交包括斑点杂交和印迹杂交。也可用RT-PCR（reversetranscribedPCR）方法检测外源DNA在植物体内的转录表达。其原理是以植物总RNA或mRNA为模板进行反转录，然后再经PCR扩增。如果从细胞总RNA提取物中得到特异的cDNA扩增条带，则表明外源基因实现了转录。此法简单、快速，但对外源基因转录的最后决定，还需与Northern杂交的实验结果结合。二、外源基因表达蛋白的检测表达蛋白的检测方法有三种：1、生化反应检测法：主要通过酶反应来检测；2、免疫学检测法：通过目的蛋白（抗原）与其抗体的特异性结合进行检测，具体方法有Western杂交、酶联免疫吸附法（ELISA）及免疫沉淀法；3、生物学活性的检测。Western杂交是将聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳分离抗原（Antigen）固定在固体支持物上（如硝酸纤维素膜，NC膜）。不同分子量大小的蛋白质在凝胶中迁移率不同，据此可确定特定的抗原存在与否以及相对丰度，或者蛋白质是否遭到降解等。蛋白质电泳后转到NC膜，放在蛋白质（如牛血清蛋白BSA）或奶粉溶液中，温育，以封闭非特异性位点，然后用含有放射性标记或酶标记的特定抗体杂交，抗原-抗体结合，再通过放射性自显影或显色观察。/iknow-pic.cdn.bcebos.com/b7003af33a87e9509fd760b61e385343faf2b42c"target="_blank"title="点击查看大图"class="ikqb_img_alink">/iknow-pic.cdn.bcebos.com/b7003af33a87e9509fd760b61e385343faf2b42c?x-bce-process=image%2Fresize%2Cm_lfit%2Cw_600%2Ch_800%2Climit_1%2Fquality%2Cq_85%2Fformat%2Cf_auto"esrc="https://iknow-pic.cdn.bcebos.com/b7003af33a87e9509fd760b61e385343faf2b42c"/>扩展资料外显子与内含子表达过程中的相对性从内含子与外显子的定义来看，两者是不能混淆的，但是真核生物的外显子也并非都“显”（编码氨基酸），除了tRNA基因和rRNA基因的外显子完全“不显”之外，几乎全部的结构基因的首尾两外显子都只有部分核苷酸顺序编码氨基酸，还有完全不编码基酸的外显子，如人类G6PD基因的第一外显子核苷酸顺序。已发现一个基因的外显子可以是另一基因的内含子，所这亦然。以小鼠的淀粉酶基因为例，来源于肝的与来源于唾液腺的是同一基因。淀粉酶基因包括4个外显子，肝生成的淀粉酶不保留外显子1，而唾液腺中的淀粉酶则保留了外显子1的50bp顺序，但把外显子2与前后两段内含子一起剪切掉，经过这样剪接，外显子2就变成唾液淀粉酶基因中的内含子。同一基因在不同组织能生成不同的基因产物来源于不同组织的类似蛋白，可以由同一基因编码产生，这种现象首先是由于基因中的增强子等有组织特异性，它能与不同组织中的组织特异因子结合，故在不同组织中同一基因会产生不同的转录物与转录后加工作用。此外真核生物基因可有一个以一的poly(A)位点，因此能在不同的细胞中产生具有不同3’末端的前mRNA，从而会有不同的剪接方式。由于大多数真核生物基因的转录物是先加poly(A)尾巴，然后再行剪接，因此不同组织、细胞中会有不同的因子干预多聚腺苷酸化作用，最后影响剪接模式。参考资料来源：/baike.baidu.com/item/%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E8%A1%A8%E8%BE%BE/3839041?fr=aladdin#2"target="_blank"title="百度百科-基因表达">百度百科-基因表达
基因检测的步骤是什么？
基因检测口腔拭子采集,具体步骤：1．基因检测准备棉签（单头）,伸进口腔,从口腔内侧两颊粘膜处（腮帮子内侧）反复擦拭20次以上,取出采样拭子棉签,放在干净白纸上阴干。2．以同样的方法采集5根拭子棉签。阴凉干燥后干净的纸质信封内保存3．请不要忘记对样本做好标记。不要和其他人物质互相接触。以免接触其他dna, 上述方法采集的样本,可以在干燥环境下保存2-3个月。不管采集什么样本,鉴定结果的准确性是一样的。因为样本采集只是从中提取dna,而每个人的dna是终身不变的,所以即使采集不同的样本,鉴定结果的准确性是一样的。口腔拭子dna提取的方法口腔拭子dna提取可以用商业化的试剂盒,方便简单易操作,用华晨阳的配套dna提取试剂盒,主要是针对口腔脱落细胞dna提取的。口腔拭子在哪里买？
目前为止世界范围之内基因检测测序最安全最便捷最准确的方式有哪些？
如果是想用靶向药物的话，检测EGFR突变。Arms法检测EGFR基因更加准确，所需的标本量少，但检测费用比较贵。如果有突变，广州市医保可以申请“吉非替尼“的特定门诊，获批准的话，自付3300就可以长期服药，5个月后可以申请赠药。厄洛替尼的广州市医保申请不需要有基因突变，获批的话，自付4500左右，4个月后可以申请赠药。广州市医保承认的基因检测医院有广东省人民医院、中山大学附属第一医院、中山大学附属肿瘤医院。如果你不是广州市的。可以去你所在省份的首府的最大的肿瘤医院或综合医院的胸外科、肿瘤科、化疗科或呼吸内科咨询。另外用PCR方法检测ALK基因，是另外一种靶向药物。如果检测出T790M突变，就是另外一种靶向药物了。
